超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)提取黃精多糖工藝研究
1、材料與設(shè)備
黃精：購于沈陽中街新藥特藥;循環(huán)水多用真空泵;HH一6數(shù)顯恒溫水浴鍋;光柵分光光度計(jì)：山東高密彩虹分析儀器有限公司;電熱鼓風(fēng)恒溫干燥箱;JY99-IIDN超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)：寧波新芝生物科技股份有限公司。
2、實(shí)驗(yàn)方法
①多糖粗提品的制備
用天平稱取研磨后的黃精碎片100g，80%的乙醇溶液80℃回流提取6h。提取后的黃精碎片于水浴鍋上烘干。
?、诔暭?xì)胞粉碎儀提取黃精多糖
準(zhǔn)確稱取經(jīng)乙醇抽提后的黃精碎片30g，放于三角瓶中，加入8倍量的蒸餾水放入超聲細(xì)胞破碎儀中，調(diào)整工作時(shí)間最大為99s，間隔時(shí)間1s，工作次數(shù)36次。然后開始用超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)進(jìn)行超聲處理，并逐漸調(diào)節(jié)工作電壓至最大。超聲處理1 h取出，過濾。向?yàn)V液中再加入6倍量的蒸餾水，按同樣的工作參數(shù)進(jìn)行第二次超聲處理，40min后取出，合并兩次濾液。抽濾，除去雜質(zhì)后將濾液取出按l：l濃縮至30 mL。然后加入3倍量的乙醇進(jìn)行沉淀，靜置大約1h至上清液與沉淀出現(xiàn)明顯分層后抽濾，在抽濾過程中不斷加入無水乙醇，待所得樣品沉淀徹底干燥后取出。
3、精多糖含量的測(cè)定
采用苯酚一硫酸法測(cè)定黃精多糖的含量具體步驟如下：
準(zhǔn)確稱取葡萄糖4 mg，置于100 mL容量瓶中。然后分別精確吸取0.4、0.6、0.8 1.0、1.2、1.4、1.6、1.8 mL。加于標(biāo)號(hào)的試管中，各以蒸餾水補(bǔ)至2.0 mL，然后加入6%苯酚1.0mL及濃硫酸5.0mL。靜置10min搖勻，室溫放置20min以后于490mm測(cè)光密度，以2.0mL水按同樣顯色操作為空白，橫坐標(biāo)為黃精多糖微克數(shù)，縱坐標(biāo)為光密度值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
4、結(jié)論分析
用于各種動(dòng)植物細(xì)胞、病毒細(xì)胞、細(xì)菌、牙孢及組織超聲波破碎提取法利用超聲波其強(qiáng)大的空化效果和許多次級(jí)效應(yīng)如：機(jī)械震動(dòng)，擊碎乳化，擴(kuò)散等可以擊碎細(xì)胞壁釋放物質(zhì)，常用于各種動(dòng)植物細(xì)胞、病毒細(xì)胞、細(xì)菌、芽孢及組織的破碎。本研究采用超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)提取黃精多糖，獲得的多糖同水煎法、稀堿浸提法相比顏色淺，雜質(zhì)少，純度高，是提取黃精多糖的一種有效方法。
